單鏈抗體及重組白介素-2雙功能抗體融合蛋白的表達及其軟件預(yù)測

目的 利用生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)資源分析融合蛋白的二級結(jié)構(gòu)及其理化性質(zhì),并探討分泌型抗成骨肉瘤單鏈雙功能抗體基因的表達.方法 采用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)將人工合成的抗體分泌信號肽序列加在抗成骨肉瘤單鏈抗體(scFv)基因5′端,其3′與白介素-2(IL-2)基因連接構(gòu)成分泌型單鏈雙功能抗體scFv- IL-2基因,將該基因克隆至逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體PLxSN,重組質(zhì)粒pL(scFv- IL-2)SN在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染PA317包裝細胞,G418篩選,直至出現(xiàn)抗性克隆,擴大培養(yǎng),用NIH3T3測定病毒滴度,將重組病毒感染人成骨肉瘤細胞命名為OSC/scFv-IL-2,以PCR,RT-PCR以及Western blotting 對scFv-IL-2基因修飾的OSC9901細胞進行鑒定.在構(gòu)建融合蛋白之后,運用DNA分析軟件DNAssist和蛋白質(zhì)分析軟件ANTHEPROT V5分析融合蛋白的氨基酸序列、二級結(jié)構(gòu)及其理化性質(zhì).結(jié)果 經(jīng)酶切、PCR及Western blotting分析鑒定,成功地構(gòu)建了融合基因表達載體pL(scFv- IL-2)SN,并獲得高滴度產(chǎn)毒細胞株C26,scFv-IL-2融合蛋白通過DNAssist和ANTHEPROT V5軟件分析獲得了融合蛋白的二級結(jié)構(gòu)及其理化性質(zhì).結(jié)論 利用生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)資源進行分析預(yù)測融合蛋白的性質(zhì),為進一步探討單鏈雙功能抗體基因融合蛋白提供依據(jù).

作 者： 史夢遠 王海濤 張芳琳 SHI Meng-yu WANG Hai-tao ZHANG Fang-li   作者單位： 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部微生物教研室,陜西,西安,710032  刊 名： 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF XINXIANG MEDICAL COLLEGE  年，卷(期)： 2008 25(2)  分類號： Q782  關(guān)鍵詞： 單鏈抗體   生物信息學(xué)資源   融合蛋白  

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