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臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)教學(xué)的點(diǎn)滴體會(huì)
臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)即我們常說(shuō)的PCR技術(shù)，是分子生物學(xué)教學(xué)中的一項(xiàng)重要內(nèi)容，也是臨床應(yīng)用非常廣泛的一項(xiàng)技術(shù)。這項(xiàng)課程的學(xué)習(xí)和學(xué)生在臨床的實(shí)習(xí)往往是分開(kāi)進(jìn)行的。學(xué)生在校學(xué)習(xí)的主要是臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)的核酸基本生物化學(xué)知識(shí)，PCR反應(yīng)的基本原理、質(zhì)量控制，臨床應(yīng)用等。當(dāng)學(xué)生進(jìn)入臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室實(shí)習(xí)工作后，他們會(huì)感覺(jué)到在學(xué)校學(xué)過(guò)的和實(shí)際看到的有很大區(qū)別，這是由于教學(xué)的側(cè)重點(diǎn)不同造成學(xué)生對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)的認(rèn)識(shí)不足，操作不夠嚴(yán)謹(jǐn)、規(guī)范。作為一名在臨床PCR實(shí)驗(yàn)室工作的技術(shù)人員，我們的體會(huì)是臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)的教學(xué)要緊密結(jié)合臨床，通過(guò)對(duì)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室各個(gè)環(huán)節(jié)地介紹實(shí)現(xiàn)對(duì)基本理論知識(shí)地講解，這樣更有利于學(xué)生融會(huì)貫通。
1、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展PCR技術(shù)必須具備的基本條件
教育學(xué)生對(duì)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室有一個(gè)總體的認(rèn)識(shí)，對(duì)學(xué)生實(shí)行規(guī)范、嚴(yán)格的入室教育,是順利完成教學(xué)實(shí)習(xí)任務(wù)的前提和保證[1]。使他們明確臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展PCR技術(shù)必須具備的基本條件，即規(guī)范的PCR實(shí)驗(yàn)室（經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心驗(yàn)收合格）；編寫(xiě)適合本實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量手冊(cè)；具備經(jīng)PCR專(zhuān)業(yè)知識(shí)培訓(xùn)的技術(shù)人員；使用有生產(chǎn)批文的PCR試劑。通過(guò)對(duì)規(guī)范的PCR實(shí)驗(yàn)室的介紹，使學(xué)生了解PCR實(shí)驗(yàn)室是要經(jīng)過(guò)國(guó)家驗(yàn)收的，實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)、安排都是有嚴(yán)格要求的。
2、通過(guò)講解PCR實(shí)驗(yàn)室的操作流程，加深他們對(duì)實(shí)驗(yàn)室的認(rèn)識(shí)。
PCR實(shí)驗(yàn)室有嚴(yán)格的操作流程，進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一流向進(jìn)行，即準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)，我們?cè)诮虒W(xué)過(guò)程中一定要重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)這一流程，在學(xué)生頭腦中強(qiáng)化這一概念。
3、通過(guò)講解PCR實(shí)驗(yàn)室的操作規(guī)程，提高學(xué)生的生物安全意識(shí)。
PCR實(shí)驗(yàn)室有嚴(yán)格的操作規(guī)程，我們某些實(shí)驗(yàn)室人員由于怕麻煩，自己本身就不嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)室的操作規(guī)程去做，比如進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室不換大衣，不換拖鞋，不帶口罩、帽子，隨意亂扔污染性廢物等。在教學(xué)過(guò)程中，應(yīng)對(duì)看似小的細(xì)節(jié)進(jìn)行強(qiáng)調(diào)，加強(qiáng)學(xué)生的認(rèn)識(shí)。作為帶教老師，我們一定要嚴(yán)格要求自己，給學(xué)生作出榜樣，同時(shí)要嚴(yán)格要求學(xué)生做到，使他們有一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度，養(yǎng)成良好的工作習(xí)慣，提高他們的生物安全意識(shí)。
4、通過(guò)講解加入內(nèi)標(biāo)來(lái)避免假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，幫助學(xué)生理解假陰性結(jié)果產(chǎn)生的原因及解決辦法。
臨床標(biāo)本在核酸提取的過(guò)程中，核酸可能丟失，可能殘留PCR擴(kuò)增抑制物，擴(kuò)增儀孔間溫度存在差異，這些原因均可導(dǎo)致擴(kuò)增出現(xiàn)假陰性結(jié)果。要使學(xué)生知道，在臨床標(biāo)本進(jìn)行核酸提取時(shí)，加入競(jìng)爭(zhēng)性或非競(jìng)爭(zhēng)性?xún)?nèi)標(biāo)，可有效地避免假陰性結(jié)果的出現(xiàn)[2]。
5、通過(guò)講解HBV DNA和HCV RNA實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，使學(xué)生了解國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口試劑相比存在的主要問(wèn)題
國(guó)產(chǎn)HBV DNA和HCV RNA實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒與進(jìn)口試劑相比存在的主要問(wèn)題主要表現(xiàn)在三個(gè)方面：①靈敏度低，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定性差。②過(guò)度追求操作的簡(jiǎn)便化，如對(duì)標(biāo)本未進(jìn)行核酸純化，加樣量和擴(kuò)增反應(yīng)體積過(guò)小，沒(méi)有內(nèi)標(biāo)。③不同批次間的試劑穩(wěn)定性差。
6、通過(guò)講解HBV DNA和HCV RNA檢測(cè)量值溯源，加強(qiáng)學(xué)生對(duì)臨床PCR實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制的認(rèn)識(shí)。
乙肝病毒和丙肝病毒核酸檢測(cè)沒(méi)有參考方法，只能通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來(lái)溯源[3]。第一代HBV DNA和HCV RNA檢測(cè)用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)分別于20xx年和1997年建立，目前已分別進(jìn)入第二代和第三代。我國(guó)也已經(jīng)研制了HBV DNA和HCV RNA檢測(cè)的一級(jí)和二級(jí)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
以上是我們?cè)谂R床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)帶教過(guò)程中的一些體會(huì)，希望教師在今后的教學(xué)過(guò)程中，能夠從臨床實(shí)際出發(fā)兼顧講授基本理論知識(shí)，使學(xué)生對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)有更全面的認(rèn)識(shí)，使他們?cè)谌蘸蟮呐R床工作中游刃有余。
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